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ELISA實驗常見問題2022已更新

  • 發布日期:2022-12-27      瀏覽次數:719
    • ELISA實驗原理簡單,步驟少,流程短,試劑盒操作相對簡便,實驗小白也能輕松上手。然而,實驗上手雖快,想要得到可靠的實驗結果,卻并不那么容易。為了更好地助力科研實驗,恒遠生物在這里將大家關心的ELISA試劑盒實驗的常見問題整理如下:

      一、關于試劑盒:


      1.你們的ELISA試劑盒能檢測什么物種?

      目前我們的試劑盒檢測的種屬主要為人、小鼠、大鼠、猴、兔、豬、雞、植物等,種屬齊全。如果試劑盒的命名帶有特定指向(如人),代表專門針對此物種;沒有指明物種,則代表該試劑盒在目前公司產品涉及的種屬(例如人、小鼠、大鼠、猴、兔等)內通用;其他特殊種屬的檢測適用性,請聯系技術支持確認。


      2.96TELISA試劑盒能檢測多少樣本?是否需要做復孔?

      為了保證實驗結果的準確性,我們建議標準品和樣品都做復孔,但并不強行要求ELISA實驗一定要做復孔/3復孔,客戶可根據自己的需求設定復孔實驗,具體實驗情況可咨詢恒遠生物技術指導。


      3.需檢測的樣品較多,能否減少標曲的孔數?

      為保證結果的準確度,不建議減少標曲的孔數,請確保能夠檢測至少6個不同的標準品濃度(含空白孔)。


      4.ELISA試劑盒要使用多次,但樣本較多,是否可以只做一次標曲?

      雖然ELISA實驗的操作步驟相同,但每次實驗的各種影響因素都會有所變化。所以,每次實驗時,都必須重新繪制標準曲線,以得到更準確可靠的檢測結果。如果需要做多次實驗,溶解后的高濃度標準品可以分裝保存于-20℃條件下,避免反復凍融,半個月內使用有效。


      二、關于樣本


      1.血清血漿樣本應該選用哪種真空采血管收集?

      血清:不含抗凝劑的采血管/含促凝劑采血管(通常為紅色、黃色、橘色管蓋的采血管)

      血漿:含抗凝劑的采血管(通常為綠色、紫色管蓋的采血管)


      樣品收集后,若在1周內進行檢測,可保存于2-8℃條件下;若不能及時檢測,請按一次使用量分裝,凍存于-20℃條件下(1個月內檢測)或-80℃條件下(3個月內檢測),避免反復凍融。檢測前,應緩慢融化冷凍過的樣本,并離心除去凍融過程中產生的沉淀物。


      2. 采集時,如何盡可能避免溶血現象?

      溶血可由多種理化因素和毒素引起。在體外,機械性強力振蕩、低溫冷凍等誘因均可引起溶血。為避免溶血對檢測結果產生影響,應注意:


      (1)靜脈采血時,回抽壓力不宜過大;


      (2)一次性采血量不宜過少;


      (3)采集的全血不宜激烈振蕩;


      (4)離心轉速不宜過大;


      (5)收集的全血需盡快處理成血清/血漿,全血不能凍融;


      (6)若需要麻醉采血,需使用沒有溶血作用的麻醉劑。


      3.組織/細胞樣本收集中提到的“反復凍融",過程應該如何操作?

      (1)組織樣本:組織研磨后,將其-80℃放置1h/液氮放置0.5h,再置于30℃水浴鍋中輕微振蕩,使其迅速融化,反復操作1-2次即可;

      (2)細胞樣本:按上述操作步驟,反復凍融2-3次。若為膜蛋白,可以適當做超聲處理,但需要控制好超聲的溫度、頻率;


      4.怎樣判斷我的樣本是否需要稀釋或做其他處理?

      試劑盒的檢測范圍不等同于樣本中待測物的濃度范圍,建議實驗前通過相關文獻預估樣本中待測物的濃度,并通過預實驗確定樣本的實際濃度情況。如果是常規樣本類型,可以咨詢ELISA技術支持,以獲取樣本的推薦稀釋倍數,并安排預實驗檢測;如果樣品中待測物的濃度過高或過低,請對樣本做適當的稀釋或濃縮;如果樣本中的分析物濃度遠低于試劑盒的檢測限,建議選擇靈敏度更高的試劑盒來檢測。


      更多實驗問題可咨詢我司業務員,為您提供專業的技術指導。