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ELISA酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)之競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗體

  • 發(fā)布日期:2013-12-18      瀏覽次數(shù):2190
    • 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)是將抗原抗體反應(yīng)的特異性和酶的催化作用相結(jié)合而發(fā)展起來(lái)的一種免疫標(biāo)記技術(shù),既可用于組織、細(xì)胞內(nèi)抗原的檢測(cè),又可用于體 液中抗原抗體的檢測(cè)。根據(jù)檢測(cè)方法的不同,可將酶聯(lián)法分為雙抗體夾心法、間接法、競(jìng)爭(zhēng)法、捕獲法和其他ELISA,今天就讓恒遠(yuǎn)來(lái)為您講解ELISA酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)之競(jìng)爭(zhēng)法。
      競(jìng)爭(zhēng)法
      既可用于抗原半抗原的定量測(cè)定,也可用于測(cè)定抗體。以抗原競(jìng)爭(zhēng)法為例,將已知抗體吸附于固相載體,加一定量已知酶標(biāo)抗原及待測(cè)抗原,使兩者 競(jìng)爭(zhēng)與固相抗體結(jié)合,經(jīng)洗滌,zui后結(jié)合于固相抗體上的酶標(biāo)抗原與待測(cè)抗原含量呈負(fù)相關(guān)。步驟如下:
      (1)已知抗體包被酶標(biāo)板,4℃隔夜。
      (2)測(cè)定管內(nèi)加一定量酶標(biāo)抗原和待檢樣品,對(duì)照管內(nèi)只加相同量酶標(biāo)抗原。溫育,洗滌。
      (3)分別于測(cè)定管、對(duì)照管內(nèi)加一定量底物顯色。
      (4)用酶標(biāo)儀測(cè)定對(duì)照管、測(cè)定管內(nèi)OD值,用空白調(diào)零。通過(guò)對(duì)照管與測(cè)定管OD值之 差,計(jì)算標(biāo)本中待測(cè)抗原含量。
      進(jìn)行ELISA操作時(shí)應(yīng)注意以下幾點(diǎn):
      ①實(shí)驗(yàn)室溫度應(yīng)控制在18℃~25℃;
      ②加樣須準(zhǔn)確,同一樣本設(shè)立對(duì)照管、測(cè)定管各兩孔,取其平均值;
      ③嚴(yán)格控制溫 育反應(yīng)溫度及時(shí)間,洗滌應(yīng)充分;
      ④ 結(jié)果判定應(yīng)以?xún)x器為準(zhǔn),肉眼僅作參考。
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