免疫組化操作中問題分析及解決辦法總結

上海恒遠生物科技有限公司不僅從事酶聯免疫試劑盒的研究與開發，我司對免疫組化也涉及其中，并且多次試驗，累計了很多今年經驗，本章小編就技術文章中為大家具體分析關于免疫組化操作中，遇到的問題及解決辦法，歡迎閱讀賞析。

問答一：染色過強
原因及相關解決方法
a 抗體濃度過高或孵育時間過長 降低抗體滴度、抗體孵育時間：室溫1小時或4度過一夜
b 孵育溫度過高超過37度 一般在室溫20-28度
c DAB顯色時間過長或濃度過高 顯色時間不超過5-12分鐘，以顯微鏡下觀察為準 

問答二：非特異性背景染色
原因及相關解決方法
a 操作過程中沖洗不充分： 每步沖洗3次每次5分鐘
b 組織中含過氧化物酶未阻斷 ：可再配置新鮮3%H2O2封閉孵育時間延長
c 組織中含內原性生物素：正常非免疫動物血清再封閉
d 血清蛋白封閉不充分：延長血清蛋白封閉時間

問答三：”染色弱
原因及相關解決方法 
a 抗體濃度過低、孵育時間過短：提高抗體濃度、孵育時間不能少 于60分鐘
b 試劑超過有效使用時間： 應更換試劑
c 操作中添加試劑時緩沖液未瀝干 ：每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液
使試劑稀釋 （應防止切片干燥）
d 室溫太低 ：低于15度要改放在37度孵育箱孵育30-60分鐘或4 度冰箱過一夜
e 蛋白封閉過度：封閉不要超過12分鐘

問答四：染色陰性
原因及相關解決方法 
a 操作步驟錯誤：應重試設陽性對照
b 組織中無抗原：設陽性對照以驗證試驗結果
c 一抗與二抗種屬連接錯誤：仔細確定一抗二抗種屬無誤

以上問答都是我司在實際操作過程中所遇到的的實際問題解答，確保實驗順利，上海恒遠生物科技有限公司竭誠為您提供服務。

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