近期開始,眾多從事醫學、生命科學、動物學、植物學等碩士研究生即將迎來他們的畢業課題。其中不乏有真正沒有自己獨立操作過ELISA實驗的新手。而即將迎來的畢業課題將又不得不靠自己獨立完成。在此。我司技術部歐陽技術總結ELISA實驗操作易走的誤區。希望能夠幫助到廣大科研新手順利完成實驗、順利畢業。
①:液體全部加入酶標孔后,將酶標板放在桌子上平行輕輕搖晃30s,使液體充分混合均勻,也使其得到充分的反應。
②:盡量做雙孔實驗,這樣才既能保證數據的準確性,又能反映出試劑盒的精密度。
③:手工洗板時每次加入洗滌液后。應靜置15~30s,不要將一個酶標孑L中的洗滌液濺入另一酶標孔中,防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標板放在毛巾或吸水紙上拍干。
④:將液體加到酶標孔中時,避免槍頭和孔內液體接觸,可使槍頭上的液滴和孑L壁接觸,液滴會自然流下去。吸入液體時的的方法是吸兩檔打一檔,防止由于槍頭的毛細作用使得部分液體不能流出而造成的誤差。
⑤:由于底物顯色劑對光及其敏感,因此要避光保存。
⑥:底物為TMB,避免與皮膚相接觸。終止液為2tool的濃硫酸具有腐蝕性,應盡量避免接觸皮膚。
⑦:要確保微量加樣器的準確性,可以使用蒸餾水和電子天平進行確定(由于蒸餾水不含雜質,溫度環境為20%左右時,lmL的水可以看作是lg、20L的水可以看作是0.2g)每一把微量加樣器都應該將其zui高量程和zui低量程進行確定。
⑧:實驗前30min將試劑盒中的所有試劑從冰箱取出,使試劑盒中的所有試劑與提取好的樣品溶液的溫度相同,酶標板只要取出所需量。
⑨:孵育時要使蓋板膜封好酶標板,防止水分蒸發,以防曲線不成線性。
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